新型 MAXPOWER 生物抗菌液可根除口腔幽门螺杆菌 | BMC 传染病
材料 乳酸甲氧苄啶（T9170）、万古霉素（V8050）、两性霉素B（A8251）、硫酸多粘菌素B（P8350）均购自Sigma-Aldrich公司（上海）；细胞计数试剂盒-8（CK04）、尿素酶活性测定试剂盒（编号BC4110）、活/死细胞染色试剂盒（编号40747ES76）均购自上海雅森生物技术有限公司（上海）；尿素检测试剂盒购自山东博安生物科技有限公司（南京）；SYTO 9/PI活/死细菌双染试剂盒（编号MX4234-40T）购自上海牟康生物技术有限公司（上海）。 二辛可宁酸(BCA)蛋白测定试剂盒(编号23,227)购自Thermo Fisher Scientific Inc.(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)。H. pylori菌株由南昌大学第一附属医院(中国江西)消化内科提供。 细胞培养和幽门螺杆菌菌株 小鼠成纤维细胞（L929）购自中国科学院细胞库（北京），在含有10%（v/v）胎牛血清（FBS）和1%（w/v）青霉素/链霉素的杜氏改良Eagle培养基（DMEM）/F12（Gibco，纽约州大岛，美国）中培养，培养箱为37°C、5% CO2 气氛。本研究中使用的H. pylori菌株CagA+ATCC43504由南昌大学第一附属医院谢川教授提供。所有H. pylori菌株均保存在-80°C下。使用前，将它们在含有5%（v/v）羊血和1%（w/v）混合抗生素的血琼脂平板上在37°C、10% CO2和5% O2气氛下复苏并培养两代。 H. pylori液体培养体系包括布鲁氏菌肉汤、10% (v/v) FBS和0.5% (w/v)混合抗生素，培养物在微量振荡器上孵育。 老鼠 所有动物实验均按照海军军医大学长海医院实验动物中心（上海，中国）批准的方案（SYXK2020-0033）进行，并根据 ARRIVE 指南进行报告。昆明小鼠购自上海实验动物中心（上海，中国），并在上海长海医院胰腺疾病研究所（上海，中国）的特定无病原体 (SPF) 条件下饲养。它们被饲养在相对湿度约为 55% 和温度为 18–22 °C 的环境中，光照/黑暗循环为 12 小时。 体外细胞相容性 采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）和活/死细胞染色法评估体外细胞相容性。将L929细胞以104/孔的密度接种于96孔板中。让细胞贴壁过夜，向培养基中添加不同浓度的MAXPOWER生物抗菌溶液（原液、1:1、1:2、1:4、1:8、1:16）以探索对细胞安全的最佳浓度。然后将细胞孵育24小时，每个培养基用100 µL/孔10％（w/v）CCK-8染料溶液替换。然后再继续孵育2小时。通过在微量读数仪（SpectraMax®i3；Molecular Devices LLC，美国加利福尼亚州圣何塞）中测量每个孔在450nm处的吸光度（OD450）来计算细胞活力。 每组有三个重复孔，细胞活力按以下公式（1）计算： $$begin{aligned}细胞活力 left(%right) & = (OD实验组 – OD空白组)\&quad/(OD对照组 – OD空白组) times 100%end{aligned}$$ （1） 活/死细胞染色试验是将 MAXPOWER 生物抗菌液与 […]