一种更快、更便宜的检测全血中免疫自身抗体的方法

用于检测免疫自身抗体的新型全血检测方法有望彻底改变诊断学，提供快速、经济有效的解决方案来检测先天性免疫错误和中和针对 I 型干扰素的抗体。

​​​​​​​​学习： 测量全血对 I 型干扰素反应的灵敏检测方法。图片来源：nobeastsofierce / Shutterstock

最近发表在期刊上的一项研究 美国国家科学院院刊 报道了一种新颖、经济高效的全血检测方法，用于测量对 I 型干扰素 (IFN) 的反应并检测针对这些 IFN 的自身抗体 (auto-Abs)。

20 世纪 80 年代初，在一名患有播散性带状疱疹的患者身上首次发现了针对 I 型干扰素的自身抗体（自身抗体）。长期以来，人们一直认为这些抗体在临床上是无症状的，在自身免疫性多内分泌综合征 1 型 (APS-1) 患者身上发现这些抗体后，它们被用作 APS-1 的诊断标记。目前，体外细胞检测可用于检测针对 I 型干扰素的自身抗体。虽然这些检测方法灵敏且可靠，但它们价格昂贵、耗时且劳动密集，限制了它们的广泛使用。

研究与发现

在本研究中，研究人员开发了一种简单、更经济、快速的方法来检测针对 I 型 IFN 的自身抗体。首先，用重组人 IFN-α2 刺激来自三名健康供体的全血。16 小时后使用多重检测评估 25 种趋化因子和细胞因子的产生。在测试的蛋白质中，由 CXC 基序趋化因子配体 10 (CXCL10) 编码的 IFN-γ 诱导蛋白 10 (IP-10) 具有最高的诱导水平，其次是白细胞介素 (IL)-6。

其他测试分子诱导效果较差。在转录组水平上，批量 RNA 测序 (RNA-seq) 证实在刺激后六小时测试的新鲜外周血单核细胞 (PBMC) 中 CXCL10 表达强烈诱导。此外，用 IFN-β 刺激可诱导高 IP-10，但用 IFN-ω 刺激对 IP-10 的诱导作用相对于 IFN-β 或 IFN-α2 较不明显。此外，用 IFN-α2 刺激来自三名健康供体的新鲜 PBMC，然后进行批量 RNA 测序 (RNA-seq)。

这证实了 CXCL10 是前 20 个最强诱导转录本之一。接下来，研究人员检查了用组织限制性 IFN（如 IFN-ε（仅限于女性生殖系统）和 IFN-κ（仅限于皮肤））刺激新鲜全血样本是否可以诱导 IP-10。用 IFN-γ（II 型 IFN）刺激作为对照。用 IFN-κ 或 IFN-ε 刺激的样本中的 IP-10 水平与没有刺激时的水平相似，这表明这些 IFN 不会诱导 IP-10。

相反，IFN-γ 刺激诱导的 IP-10 水平与 IFN-α2、IFN-β 或 IFN-ω 诱导的水平相当。这些发现表明 IP-10 是检测针对 I 型或 II 型 IFN 的自身抗体的合适靶标。进一步的实验表明，为了获得最佳结果，血液必须收集在含有肝素锂的试管中，并在取样后立即进行刺激，最好在 24 小时内，理想情况下为 14 至 16 小时，或至少 6 小时。

接下来，研究人员收集了 5 名 APS-1 患者和 9 名健康个体的血液样本，并用 IFN-α2、IFN-β 或 IFN-ω 刺激这些样本。刺激后 16 小时测量 IP-10 水平。研究小组观察到健康供体的样本中 IP-10 的强烈诱导。相反，在用 IFN-ω 或 IFN-α2 刺激后，APS-1 患者的 IP-10 诱导消失，揭示了患者体内自身抗体的中和活性。

此外，他们还检测了一名未经基因诊断的具有针对 I 型 IFN 的自身抗体的患者的血液，一名 X 连锁核因子 κB (NFKB) 激酶调节亚基γ (IFBKG) 等位基因杂合子的女性，该等位基因携带中和 IFN-ω 的自身抗体，以及一名常染色体 NFKB2 等位基因杂合子的患者，该等位基因携带中和 IFN-ω 和 IFN-α2 的自身抗体。

用 IFN-β、IFN-α2 或 IFN-ω 刺激后，TYK2 或 IFNAR1 缺陷患者的血液 IP-10 水平与未刺激时观察到的水平相当，这意味着完全没有反应。同样，一名 IFNAR2 缺陷患者没有反应，而另一名患者在用 IFN-ω 或 IFN-β 刺激后检测到 IP-10 水平。IRF9 缺陷患者的 IP-10 诱导也较弱，可检测到。

结论

综合起来，这些发现表明，IFN-γ、IFN-β、IFN-α2 或 IFN-ω 可在健康人的全血中诱导 IP-10，但在患有先天性 I 型 IFN 免疫缺陷或针对相应 I 型 IFN 的自身抗体的患者中则不会。与传统的中和测定相比，该方法具有许多优势；它是一种基于全血的测定，不需要处理血液样本。

此外，刺激步骤非常高效，只需一夜刺激（或至少六小时）。此外，该检测不需要昂贵或复杂的机器，所需的试剂和材料在大多数诊断实验室中都很常用。每个样本的成本估计在 3 至 5 美元之间，因此可以更广泛地用于临床。总体而言，该检测是一种可靠且灵敏的工具，可用于检测针对 IFN 的自身抗体和 I 型 IFN 反应途径的先天性缺陷。

由于其实用性、成本效益和快速提供结果的能力，该检测有可能对涉及自身抗体和 I 型 IFN 通路中的遗传错误的病症的诊断和监测产生重大影响。